Nanoscale analysis of signal transduction in normal and malignant hematopoietic (stem) cells.

Deze toekenning betrof nieuwe apparatuur van de firma Cell Biosciences, nu Protein Simple (http://www.proteinsimple.com). De apparatuur, de NanoPro (CB1000), kan zeer kleine hoeveelheden cel-lysaat analyseren met behulp van Isolectrisch focussing, gevolgd door immunodetectie. Dit gebeurt in glas-capillairen met een volume van 400 nanoliter. Omdat de techniek gebruik maakt van immunodetectie zijn de gebruikte antilichamen cruciaal voor de kwaliteit van de data. Protocollen met de juiste antistoffen worden op de website van de company gepubliceerd worden: (http://www.proteinsimple.com/literature_by_type.html?product=inst_nanop…)
Voor lopend onderzoek waarbij onder andere naar de activatie van ERK1 en ERK2 is gekeken is de NanoPro gebruikt ter vervanging van de standaard western blot. Omdat de apparatuur direct een gekwantificeerd resultaat levert en medium throughput is, kan er snel veel data worden gegenereerd. Wij hebben bijvoorbeeld effecten van het verlies aan het eiwit PACSIN2 ( een regulator van internalisatie van membraan-eiwitten) op de ERK1/2 activatie door EGF bekeken. Naast de ERK1/2 assay hebben we ook gebruik gemaakt van de NanoPro voor Akt en phospho-Akt analyses. Deze experimenten met de NanoPro hebben een duidelijk een voordeel opgeleverd t.o.v. western blotting, met name door de goede kwantificatie.
De NanoPro is de afgelopen periode gebruikt door medewerkers binnen Sanquin Research van onze eigen afdeling en van de afdelingen Blood Cell Research en Hematopoiese . Daarnaast is de apparatuur gebruikt door onderzoekers van het NKI die, net als wij, goede resultaten hebben geboekt met de ERK assay.